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PCR是聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction )的簡稱。 該方法又稱特異性DNA序列體外引物靶向酶擴增法,可特異性擴增極微量靶DNA數百萬倍,是基因擴增技術的一大創新。
PCR技術以其特異性強、靈敏度高、對檢測樣品要求低、方便快捷等優點,廣泛應用于各種臨床診斷。 目前國內二級以上醫院開展了PCR技術的各種臨床應用,PCR實驗室是承載PCR技術應用的設施,只有實驗室的合理設計才能確保檢測結果的可靠性,因此PCR實驗室的設計和建設越來越受到建設部門的重視。
從PCR實驗室平面布局、通風空調系統兩方面進行設計要點分析,供設計同行和建筑公司相關人員參考。
壹
PCR實驗室平面布局設計要點分析
1、平面功能分區要點分析
根據第《臨床基因擴增檢驗實驗室基本設置標準》 1.1條的要求,PCR實驗室通常由試劑儲備區、標本制備區、擴增區、擴增分析區4個區域組成。
PCR實驗室區域設置不固定,需要說明以下幾種情況。
樣品擴增前需要粉碎處理時,需要增加用于樣品粉碎的區域;
采用實時熒光PCR方法可將擴增區和分析區合并為一個區;
采用全自動化PCR分析儀,可將標本制備區、擴增區和分析區合并為一個區。
2、實驗室功能及設備設計要點分析
(1)試劑儲備區
該區域主要完成試劑和主反應混合液的儲存、配制和密封工作。 運到本區域的所有試劑和材料不得通過其他區域,試劑和原材料必須在本區域內儲存和制造。 這個區域的氣壓要對外界保持正壓。 該區域的設備主要有冰箱、天平、攪拌機、低速離心機、加樣器、可移動紫外線燈等。 由于這個區域有很多試劑,“安全”是平面設計的首要考慮,平面設計時需要通風順暢,逃生順暢。 首先,實驗臺布置在房間兩側,中間的通道都通向走廊,便于疏散。 另外,按照國際人體工程學標準,實驗臺和實驗臺的通道設計為1500mm,中間通道可以滿足兩邊人中間人的要求。
(2)標本制備區
該領域的功能包括標本保存、核酸提取和貯藏、標本添加到擴增反應管和DNA合成的測定。 樣品直接運輸到本區域儲存在本區域內,不得通過其他區域。 對于氣流壓力的控制,在本區內進行樣品操作可能產生氣溶膠傳播,本區應保持外界負壓,以免氣溶膠傳播擴散對外界造成污染; 同時,本區采用擴增反應混合物制備和對擴增區及擴增產物分析區正壓,避免鄰近區進入本區的氣溶膠傳播污染。該區域的設備主要有生物安全柜、加樣器、臺式高速離心機、臺式低速離心機、水浴鍋、冰箱、攪拌機和可移動紫外線燈等。 其中值得注意的是,生物安全柜優選B2型。 該生物安全柜所有吸入氣流和垂直氣流均經高效過濾器過濾后向室外排出,不再進入生物安全柜循環或返回該區域。 該生物安全柜可避免提取核酸在柜內反復循環,標本交叉“污染”,出現假陽性結果。
(3)放大區域
該區域的功能是DNA擴增和擴增片段的測定。 另外,來自試劑儲存制備區域的反應混合液、制備的DNA模板、來自樣品制備區域的反應混合液的添加等也可以在該區域進行。 要控制氣流壓力,對相鄰區域施加負壓,防止氣溶膠傳播從本區泄漏。 為避免氣溶膠傳播污染,應盡量減少在本區內不必要的行走。 個別操作,如樣品添加等應在潔凈臺中進行。
該區域設備主要為核酸擴增熱循環、加樣器、超凈長椅等。 其中熱循環電源應專用,并配有穩壓電源或UPS,以防止電壓波動對放大測量的影響。
(4)分析區域
這個領域的功能是擴增產物的分析。 這個地區可能會使用引起基因突變的有毒物質,所以要特別注意實驗人員的安全防護。 對于氣流壓力的控制,該區域是PCR實驗的最后一步,壓力必須最低,對鄰近區域為負壓,以免氣溶膠傳播從該區域漏出。 為避免氣溶膠傳播污染,應盡量減少本區內不必要的出行。
該區域的設備主要有標本盛放裝置、電泳裝置(罐)、電泳裝置、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀、洗衣機等。
3、人流與材料流線設計要點分析
進入實驗室區域的工作人員請遵循以下路徑。
通道緩沖室實驗區域
工作人員離開實驗室的路徑如下:
實驗區域緩沖室通路
進入每個區域必須嚴格地沿單一方向進行,不同的工作區域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。 工作人員離開時,不能把工作服帶出去。 這種人流單向流動可以降低人流造成的交叉污染風險。
所有物品進入實驗區必須通過雙層門聯鎖的傳遞窗,用傳遞窗消毒后方可進入,實驗室內所有物品也必須通過傳遞窗才能傳遞到實驗室以外的清潔公共區域。 這類物品有組織的單向流動,可以降低物品錯誤和混淆的風險。
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